?香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)能力、產(chǎn)胞外蛋白酶和生物被膜能力影響（三）
2.3香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌產(chǎn)嗜鐵素和胞外蛋白酶的影響
由于嗜鐵素平板由鉻天青、十六烷基三甲基溴化銨和鐵離子組成，故呈藍(lán)色（圖3A）。當(dāng)細(xì)菌產(chǎn)生嗜鐵素時(shí)，嗜鐵素平板會(huì)出現(xiàn)淡黃色暈圈，這是由于嗜鐵素對(duì)Fe3＋選擇性黏著，對(duì)Fe3＋具有一定的親和性。由圖3A可知，空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、0.005%和0.010%組均出現(xiàn)黃色暈圈，且呈逐漸減小趨勢(shì)，0.015%、0.020%、0.025%組均未見(jiàn)黃色暈圈，表明香芹酚能夠抑制惡臭假單胞菌產(chǎn)嗜鐵素的能力，且香芹酚含量越高，抑制效果越明顯。不同小寫(xiě)字母表示組間差異極顯著（P＜0.01）。下同。
圖3不同體積分?jǐn)?shù)香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌產(chǎn)嗜鐵素（A）和胞外蛋白酶（B、C）的影響
由圖3B可知，平板上的空白對(duì)照組和DMSO對(duì)照組出現(xiàn)較大的白色透明圈，說(shuō)明惡臭假單胞菌分泌的蛋白酶分解了平板中的蛋白質(zhì)，導(dǎo)致白色透明圈的產(chǎn)生。而香芹酚處理后，白色透明圈直徑減小，且香芹酚含量越高，白色透明圈直徑越小，表明香芹酚能夠抑制惡臭假單胞菌胞外蛋白酶的產(chǎn)生。由圖3C可知，香芹酚體積分?jǐn)?shù)為0.025%時(shí)，透明圈直徑比空白對(duì)照組減小31.15%。0.015%、0.020%、0.025%組的透明圈直徑極顯著小于空白對(duì)照組（P＜0.01），說(shuō)明香芹酚能夠抑制惡臭假單胞菌胞外蛋白酶的產(chǎn)生，且香芹酚含量越高，抑制效果越好。由此可知，香芹酚能夠抑制惡臭假單胞菌胞外蛋白酶產(chǎn)生，可有效阻止其對(duì)蛋白質(zhì)的利用，減緩食品腐敗變質(zhì)，在肉及肉制品等高蛋白食品保鮮中具有巨大的應(yīng)用潛力。
2.4香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌產(chǎn)生物被膜的影響
細(xì)菌生物被膜有復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)，是細(xì)菌黏著在接觸表面后分泌的多糖類物質(zhì)、脂質(zhì)蛋白、脫氧核糖核酸等組成的復(fù)合物，其包裹方式可有效保護(hù)內(nèi)部細(xì)菌，增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)環(huán)境的抵抗力，有利于其在惡劣環(huán)境中生存。由圖4可知，香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌生物被膜的產(chǎn)生呈現(xiàn)濃度依賴性抑制作用。香芹酚含量越高，生物被膜抑制作用越明顯。與空白對(duì)照組相比，當(dāng)用0.015%～0.025%香芹酚處理惡臭假單胞菌后，其產(chǎn)生的生物被膜減少50.9%～86.35%。0.025%組惡臭假單胞菌生物被膜產(chǎn)量極顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.01），說(shuō)明香芹酚能夠抑制惡臭假單胞菌產(chǎn)生物被膜，且香芹酚含量越高，抑制效果越好。Addo等研究發(fā)現(xiàn)，香芹酚和桉樹(shù)腦可通過(guò)干擾細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力分別抑制金黃色葡萄球菌和陰溝桿菌的生物被膜形成；劉楠也發(fā)現(xiàn)，香芹酚對(duì)熒光假單胞菌的生物被膜有破壞作用。與本研究結(jié)果一致。綜上，香芹酚可以有效抑制惡臭假單胞菌生物被膜的產(chǎn)生能力。
圖4不同體積分?jǐn)?shù)香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌生物被膜產(chǎn)生能力的影響
2.5香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌核酸泄漏的影響
細(xì)胞膜是具有彈性的半透性膜，可選擇性地交換物質(zhì)，菌液中大分子含量變化是反映細(xì)胞膜滲透性變化的重要指標(biāo)，如果大分子含量變化顯著，說(shuō)明細(xì)胞膜可能受到了嚴(yán)重?fù)p壞。由圖5可知，隨著香芹酚含量增加，核酸泄漏量增多；隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，惡臭假單胞菌核酸泄漏量增多。經(jīng)香芹酚處理15 min后，0.005%～0.025%組核酸泄漏量比空白對(duì)照組增加41.32%～77.84%；處理45 min后，0.005%～0.025%組核酸泄漏量比空白對(duì)照組增加60.43%～82.97%。香芹酚處理15、30、45、60 min，0.005%～0.025%組核酸泄漏量均極顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.01）。Zhang Junshun等研究表明，香芹酚會(huì)破壞細(xì)菌細(xì)胞膜，改變其細(xì)胞膜滲透性，導(dǎo)致核酸泄漏，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。本研究結(jié)果中，核酸泄漏物變化趨勢(shì)與Ma Maomao等在研究香芹酚和獨(dú)活素對(duì)大腸桿菌O157:H7和鼠傷寒沙門(mén)氏菌的協(xié)同作用中的變化趨勢(shì)相似，Abdelhamid等研究中也發(fā)現(xiàn)香芹酚能夠抑制沙門(mén)氏菌生長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)核酸泄漏，且具有濃度依賴性，與本研究結(jié)果相似。
圖5不同體積分?jǐn)?shù)香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌核酸泄漏的影響
3、結(jié)論
本研究采用不同體積分?jǐn)?shù)的香芹酚處理惡臭假單胞菌，觀察香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌的抑菌效果。結(jié)果表明，當(dāng)香芹酚體積分?jǐn)?shù)≥0.015%時(shí)，對(duì)惡臭假單胞菌的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)能力、產(chǎn)胞外蛋白酶和生物被膜能力具有顯著的抑制作用。此外，核酸泄漏結(jié)果表明，香芹酚能夠引起胞內(nèi)物質(zhì)泄漏，破壞惡臭假單胞菌的細(xì)胞完整性。綜上所述，香芹酚對(duì)惡臭假單胞菌具有良好的抑制作用，在高蛋白食品如肉及肉制品保鮮中具有巨大的應(yīng)用潛力。
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