益生菌發酵葡萄糖酸鈉母液生長曲線測定與分析
本研究擬以提取葡萄糖酸鈉后的母液作為營養物質，利用釀酒酵母菌、雙歧桿菌及乳酸菌獨特的糖類發酵能力，探討益生菌發酵葡萄糖酸鈉母液的可行性。以期在獲得大量益生菌提高葡萄糖酸鈉母液附加值，為葡萄糖酸鈉母液再利用提供方向。
生長曲線的測定
①挑取釀酒酵母、雙歧桿菌和乳酸菌分別接種于A培養液中，搖床震蕩過夜培養，以獲得處于生長對數期的活化種子液。
②將活化好的釀酒酵母菌、乳酸菌、雙歧桿菌、雙菌劑1和雙菌劑2按10%的接種量接入A培養液中，并置于37℃下培養箱中培養；每隔4 h取樣，10倍梯度稀釋，并涂布平板。
③以培養時間（h）為橫坐標，各時間所對應的活菌濃度（CFU/ml）為縱坐標，繪制各菌的生長曲線并計算代時[8]。
式中：t1、t2——選取微生物進入指數生長期后，細胞數量增長最快的兩個時間點（h）；
x1、x2——t1、t2時間點分別對應的每毫升培養液中可培養的細胞數量（CFU/ml）。
益生菌生長曲線測定結果
將10%體積的釀酒酵母菌、雙歧桿菌、乳酸菌、雙菌劑1、雙菌劑2分別接種到A培養液后，測定生長曲線。為方便比較雙菌劑中的釀酒酵母菌生長，釀酒酵母菌在37℃條件下培養。單菌培養曲線見圖1～圖3。
從圖1酵母菌的生長曲線看出，釀酒酵母在A培養液中生長4 h左右進入對數期；培養至12 h，釀酒酵母菌到達穩定期，最高濃度為7.5×107CFU/ml。37℃培養時，釀酒酵母菌在A培養液中的代時約為1.50 h。
從圖2雙歧桿菌的生長曲線數據得出，雙歧桿菌在37℃培養條件下，16 h時進入對數期；培養32 h達到穩定期，雙歧桿菌活菌最高含量達到4.5×109CFU/ml。在A培養液，37℃培養，雙歧桿菌生長代時為1.36 h。
圖1釀酒酵母菌在A培養液中的生長曲線
圖2雙歧桿菌在A培養液中的生長曲線
圖3乳酸菌在A培養液中的生長曲線
乳酸菌單菌培養生長曲線見圖3。在A培養液中，37℃條件下，乳酸菌培養8 h進入對數期，12 h達到穩定期。乳酸菌濃度最高達到5.7×109CFU/ml，由計算得出，在A液培養液中，37℃條件下，乳酸菌生長代時為0.81 h。
釀酒酵母菌和其他菌在進行雙菌培養時，有可能起到促進作用也有可能起到抑制作用。本試驗將雙歧桿菌、乳酸桿菌分別和釀酒酵母菌混合，等體積制成雙菌劑，接入A培養液中培養，繪制各自生長曲線。
圖4 BM1在A培養液中的生長曲線
圖5 BM2在A培養液中的生長曲線
雙歧桿菌和釀酒酵母菌混合接種到葡萄糖酸鈉母液后，37℃培養，定時取樣繪制生長曲線見圖4。
從圖4中可以看出，37℃培養條件下，雙歧桿菌和釀酒酵母菌兩種菌混合培養比各自單獨培養的生長曲線表現為適應期延長，穩定期拖后?；旌吓囵B時，雙歧桿菌最高濃度達到1.8×108CFU/ml，代時為1.80 h；釀酒酵母菌最高濃度達到3.5×107CFU/ml，代時為2.10 h。雙歧桿菌和釀酒酵母菌都比單獨培養時濃度降低（4.3×109CFU/ml和4.0×107CFU/ml），代時延長（0.44 h和0.60 h）。
乳酸菌與釀酒酵母菌等量混合后的菌液在A培養液中的生長曲線見圖5。
對比乳酸菌與釀酒酵母菌兩種菌單獨培養的生長曲線菌和混合培養生長曲線，可以看出混合后兩種菌同樣表現為適應期延長，穩定期拖后，濃度明顯低于各自單獨培養。乳酸菌與釀酒酵母混合培養時，乳酸菌最高濃度達到5.6×109CFU/ml，代時為1.42 h；釀酒酵母菌最高濃度達到3.8×107CFU/ml，代時為2.52 h，均比單獨培養時濃度降低（0.1×109CFU/ml和3.7×107CFU/ml），代時延長（0.61 h和1.02 h）。
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