特雷唑來與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)用使用對結(jié)核分枝桿菌的生長抑制作用——資料與方法
目的評價特雷唑來對不同耐藥類型的結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的體外抑菌作用，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法采用微孔板觀察法，測定特雷唑來對標準株H37Rv及臨床分離的敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥以及廣泛耐藥各20株(共100株)的MIC，再測定特雷唑來與7種常用抗結(jié)核藥物聯(lián)合使用時，對H37Rv和10株MTB臨床分離株(敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥以及廣泛耐藥各2株)的MIC，通過計算分級抑菌濃度指數(shù)(FICI)，觀察特雷唑來對結(jié)核分枝桿菌的體外抑菌作用以及與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)合使用時是否有協(xié)同作用。結(jié)果94.0%(94/100)的結(jié)核分枝桿菌臨床分離株可被≤0.5mg/L的特雷唑來抑制生長，特雷唑來對敏感株、MDR菌株(耐多藥和廣泛耐藥)及非MDR耐藥菌株(單耐藥和多耐藥)的MIC差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.578，P>0．05)。特雷唑來與7種抗結(jié)核藥物在體外聯(lián)合使用時對結(jié)核標準菌株H37Rv和臨床分離株均未表現(xiàn)出相關(guān)性。結(jié)論特雷唑來對結(jié)核分枝桿菌,尤其是耐多藥和廣泛耐藥菌株，均有很好的體外抑菌作用，且與細菌對其他抗結(jié)核藥物是否耐藥無關(guān)。
結(jié)核病是一種嚴重危害人民身體健康的慢性傳染性疾病。世界衛(wèi)生組織(WHO)新出版的《2015年全球結(jié)核病報告》以及《全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查資料匯編》，均強調(diào)全球和我國新發(fā)肺結(jié)核患者以及新發(fā)耐多藥結(jié)核病患者逐年增加。耐藥結(jié)核病尤其耐多藥(MDR-TB)和廣泛耐藥(XDR-TB)結(jié)核病已成為全球結(jié)核控制工作中的重點和難點。研究耐多藥結(jié)核(MDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核(XDR-TB)耐藥機制以尋找新的抗耐多藥結(jié)核(MDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核(XDR-TB)藥物變得刻不容緩。第一代噁唑烷酮類藥物利奈唑胺在我國結(jié)核病臨床治療中剛剛起步，第二代噁唑烷酮類藥物特雷唑來(torezolid)對臨床所有的G+,某些G-菌及非典型衣原體顯示出較好的抑菌作用。本研究通過測定第二代噁唑烷酮類藥物特雷唑來對臨床分離的結(jié)核分枝桿菌的體外抑菌作用，探討特雷唑來與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)用時的體外相互作用，為臨床合理使用特雷唑來提供實驗室依據(jù)。
資料與方法
材料
1菌株來源：結(jié)核分枝桿菌菌株：H37Rv標準株(ATCC27294)和100株臨床分離株均為重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心結(jié)核實驗室(2015.01.01-2016.05.30)保留菌株。100株臨床分離株已經(jīng)結(jié)核菌藥物敏感性試驗(比例法)確定的敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥和廣泛耐藥的結(jié)核分枝桿菌菌株各20株。
2主要藥物和試劑：特雷唑來(美國MCE上海皓鴻藥物研究有限公司原粉),異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布汀均為美國Sigma公司產(chǎn)品。
方法
1微孔板觀察法檢測MIC(mg/L)：特雷唑來0.016-8,異煙肼0.0125-1.6，利福平0.0625-8，鏈霉素0.125-16，乙胺丁醇0.3125-40，卡那霉素0.3125-40，氧氟沙星0.125-16，利福布汀0.03125-4，藥物濃度以二倍稀釋方式由高至低遞減。將標準株H37Rv和100株臨床分離菌株轉(zhuǎn)種于改良羅氏培養(yǎng)基上，刮取培養(yǎng)2-3周的新鮮菌落，磨菌比濁制成1麥氏單位。再用液體培養(yǎng)基稀釋100倍后，向無菌96孔板各微孔加入200μL菌液。各菌株均設(shè)2個不含抗菌藥物對照孔，2個含10%及1%菌液濃度的生長對照孔和2個僅含有液體培養(yǎng)基的空白對照孔。將96孔板于37℃孵育，7 d后每日觀察結(jié)果，孔底出現(xiàn)肉眼可見的白色菌體沉淀為生長陽性，無肉眼可見的菌體沉淀為生長陰性。本研究中MIC定義為孔底可見白色菌體沉淀<10%對照孔的最低藥物濃度。空白對照孔出現(xiàn)白色沉淀時，提示檢測板有污染，需重新進行檢測。
2觀察特雷唑來與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)用的體外相互作用：從上述菌株中選取H37Rv和10株臨床分離株，其中包括敏感株、單耐藥菌株、多耐藥菌株、耐多藥菌株、廣泛耐藥菌株各2株，進行藥物相互作用實驗。菌株對上述7種藥物單獨應(yīng)用的MIC檢測及其與特雷唑來聯(lián)合應(yīng)用的MIC檢測方法同上。聯(lián)合用藥中每種抗結(jié)核藥的濃度范圍以二倍遞增的方式，選取1/32-8倍MIC的9個濃度。計算分級抑菌濃度指數(shù)(fractional inhibitory concentration index，F(xiàn)ICI)：FICI=甲藥聯(lián)用MIC/甲藥單用MIC+乙藥聯(lián)用MIC/乙藥單用MIC，F(xiàn)ICI≤0．5為協(xié)同作用，0．54為拮抗作用。
特雷唑來與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)用使用對結(jié)核分枝桿菌的生長抑制作用——資料與方法
特雷唑來與其他抗結(jié)核藥物聯(lián)用使用對結(jié)核分枝桿菌的生長抑制作用——統(tǒng)計學(xué)處理、討論