恒河猴肺中陰溝腸桿菌的分離鑒定及藥物敏感性試驗——結果、討論
2、結果
2.1菌落特性
細菌經培養在SS培養基上生長成濕潤、表面光滑、白色或乳白色、不透明的圓形菌落(如圖2A)，革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陰性小桿菌(如圖2B)。
圖2恒河猴肺組織分離菌菌落及菌體形態
2.2生化特性
三糖鐵培養基分離培養，該菌產酸產氣。將ID 32E鑒定卡反應結果編號輸入ATB鑒定系統，判定該細菌為陰溝腸桿菌，ID為99.9%，T為0.71，ID編碼35074753311，生化結果見表2。
2.3藥物敏感性試驗
陰溝腸桿菌藥敏試驗測得的抑菌圈直徑大小見表3。從表中可看出該菌對氨芐西林、頭孢呋辛中等敏感;對諾氟沙星、阿米卡星、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢噻肟敏感。
表3陰溝腸桿菌藥敏試驗結果
圖3恒河猴肺組織病理改變(HE染色，×100)
2.4病理結果
肺部病變明顯部位制作病理切片，鏡檢可見肺內炎性肉芽腫形成(圖3A)，泡沫細胞聚集，血管支氣管周圍淋巴細胞浸潤(圖3B)。
表2細菌生化特性檢測結果
2.5小鼠致病性試驗
實驗組小鼠于接種菌液后5 h出現活動減少、精神萎靡、閉目、呼吸急促等臨床表現，19 h內全部死亡，解剖可見肺葉出血、胃腸鼓氣、十二指腸腸壁變薄等病變(如圖4A、4B)。取病變肺臟組織進行細菌培養，分離出陰溝腸桿菌，表明該株陰溝腸桿菌對小鼠有較強的致病性。對照組小鼠行為表現及剖檢情況均正常(如圖4C)。
3討論
陰溝腸桿菌屬腸桿菌科腸桿菌屬，是條件致病菌，通常在人和動物的腸道內寄生。如朱旗等發現在賽馬腸道菌群中存在陰溝腸桿菌，黃小蘭等從圈養滇金絲猴糞便中分離到陰溝腸桿菌。近年來陰溝腸桿菌備受關注是因為其引發的呼吸系統感染疾病日益增多。大量研究表明，某些嚴重的基礎疾病如燒傷、手術創傷、惡性腫瘤等，以及實施氣管切開、導尿、靜脈插管等侵入性診療操作，都能破壞機體免疫屏障結構，造成免疫功能降低;另外激素等免疫抑制劑、化療藥物、抗生素的大量應用及不適當的聯合用藥抑制了正常菌群，使機體內的正常菌群大量減少，導致陰溝腸桿菌等條件致病菌增多并大量繁殖成為優勢菌種，并定位移植到腸外的其他器官系統，感染部位主要是下呼吸道和泌尿道。目前，對人類由陰溝腸桿菌引起的疾病研究較多，動物方面也較常見。如陰溝腸桿菌引起呼吸系統疾病的報道，包扣大熊貓呼吸道、七彩山雞肺臟、亞洲黑熊肺臟、綿羊肺部、牛肺臟感染;另有陰溝腸桿菌引起孔雀胚死亡、羅氏沼蝦幼蝦死亡、與馬鏈球菌獸疫亞種混合感染引起的馬出血性敗血癥等報道。但未見恒河猴感染的有關報道。
本文中該恒河猴由治療室轉出后突然死亡，可能是由于治療室與飼養大籠溫差較大，且突然改變環境引起的。病理變化主要為呼吸系統和消化系統，與由陰溝腸桿菌單獨感染引起的綿羊肺炎的病理變化，如肺尖葉、心葉、隔葉呈不同程度的出血、充血及肝變，消化道表現為輕重不同的卡他性和出血性炎癥變化基本一致。恒河猴腹瀉及肺炎是常見病與多發病，嚴重者導致死亡。本文從死亡恒河猴肺中分離到陰溝腸桿菌，這可能與恒河猴腹瀉時抵抗力下降以及不適當的使用廣譜抗菌藥物，致使恒河猴體內菌群失調，導致陰溝腸桿菌從消化道移位到呼吸系統有關。另外也可能與院內獲得性感染有關，隨著住院時間的延長，恒河猴與病原微生物接觸的機會增加，危重情況下更易感染陰溝腸桿菌。因此入院后應隔離治療，避免交叉感染。
陰溝腸桿菌與銅綠假單胞菌、鮑曼氏不動桿菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌是引起下呼吸道感染的主要革蘭陰性腸桿菌。陰溝腸桿菌的耐藥機制較為復雜，包括作用靶點的改變、主動外排活躍和外膜蛋白缺失、整合子、qnr基因介導、產生β-內酰胺酶等，其中產超廣譜β-內酰胺酶是腸桿菌科細菌最主要的耐藥機制。長期使用大量的抗菌藥物會引起細菌耐藥和交叉耐藥，造成臨床治療失敗，使臨床感染治療面臨潛在威脅。
本研究中陰溝腸桿菌對8種所試抗菌藥物均敏感，未出現耐藥的情況，這可能與治療時間較短有關系。在我國獸醫臨床治療過程中，濫用抗菌藥物的現象極為普遍，僅憑經驗長期大量的使用廣譜抗菌藥物會引起動物體內菌群失調，導致陰溝腸桿菌感染及耐藥性的產生。因此在實際工作中，為了有效控制該菌所致的各種感染，要做到以下幾點:首先，采取有效的隔離措施，及時、正確治療嚴重的基礎疾病，做到早發現早隔離早治療;其次避免或縮短侵入性操作，降低陰溝腸桿菌侵入性感染的機率;同時加強抗菌藥物的流通管理工作，根據藥敏試驗選用抗菌藥物，合理使用抗生素和激素，減少陰溝腸桿菌耐藥性的產生;最后做到徹底消毒滅菌，避免陰溝腸桿菌的散播。
本研究中，從死亡恒河猴肺中分離到陰溝腸桿菌，該株陰溝腸桿菌對小鼠具有較強的致病性。藥敏試驗結果表明陰溝腸桿菌對頭孢哌酮、頭孢噻肟最敏感，這為今后發現相同疾病的臨床治療工作提供一定的理論依據。
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